細胞成活率形態(tài)學觀察法及檢測法

細胞成活率形態(tài)學觀察法及檢測法：

細胞成活率，判斷之形態(tài)學觀察法：

細胞內(nèi)出現(xiàn)顆粒或空泡。

細胞內(nèi)如果出現(xiàn)顆粒物質(zhì)，表明細胞處于非健康狀態(tài)。

同樣，細胞內(nèi)出現(xiàn)空泡也說明細胞處于非健康狀態(tài)。

 細胞喪失雙折射性：

如果發(fā)生在單層細胞：一個具有雙折射性的正常細胞逐步失去這一特征（相差顯微鏡下細胞邊緣成暈環(huán)），則提示該細胞已經(jīng)死亡，即zui終干枯死亡。

如果發(fā)生在懸浮細胞：正常懸浮細胞清晰透明，如胞內(nèi)出現(xiàn)顆粒或變渾濁表明細胞受損，甚至死亡。

怎樣去除死細胞？單層培養(yǎng)的細胞死亡后，一般會漂浮起來，因此不需要特殊處理。

而懸浮細胞或原代培養(yǎng)細胞則要通過密度離心（如Ficoll梯度）方法收集死細胞。

細胞成活率檢測實驗

即刻檢測實驗——

染料柜染實驗：原理——萘黑、臺盼藍以及很多其他染料均不能透過活細胞。概要——將細胞懸液與染料混勻，在低倍顯微鏡下檢查。材料包括無菌材料,即細胞；生長液；0.25%胰酶；PBSA.非滅菌材料即：血細胞計數(shù)板；生存力染料；巴斯德吸管；顯微鏡；手執(zhí)計數(shù)器。操作步驟：

1、用胰蛋白酶消化或離心，重懸制備高深度的細胞懸液

2、取一塊干凈的血細胞計數(shù)板，將蓋玻片固定在適當位置上。

3、將一<滴細胞懸液和一滴（臺盼藍）或四滴（萘黑）染料混勻/li>

4、加至血細胞計數(shù)板的計數(shù)室中。

5、靜置1~2min（但不要放置很久，否則活細胞會受到損傷而吸收染料）。

6、將計數(shù)板置于顯微鏡下，用10倍物境找到計數(shù)網(wǎng)格。

7、計數(shù)細胞總及著色細胞的數(shù)目。

8、清洗血細胞計數(shù)板，放入盒內(nèi)。

實驗分析-計算未著色細胞的百分數(shù)，該數(shù)字即為本方法所得出的細胞生存力百分數(shù)。

據(jù)統(tǒng)計，原代培養(yǎng)細胞成活率一般為50%~90%。細胞系一般為90%~100%存活。凍融細胞一般為50%~80%存