感受態細胞的電轉化過程

        zui近，上海信帆生物科技有限公司在進行了一項大腸桿菌電轉化感受態細胞的實驗。實驗過程操作規范順利，得出的結果良好。

實驗所需試劑：國產細胞菌株、培養基、10%甘油、DNA細胞

*天：
1. 將適合菌株（如XL1-Blue, DH5α）置于LB或其他營養豐富的培養基上，在37°C下過夜培養
2. 高溫滅菌大的離心瓶（250-500ml）以備第二天搖瓶用
3. 準備幾瓶滅菌水（總量約1.5升），保存于冷凍室中以備第二天重懸浮細胞用

第二天：
4. 轉移0.2-1ml過夜培養物至裝有500ml LB（或其他營養豐富的培養基）的1-2升擋板搖瓶中
5. 37°C下劇烈振蕩培養2-6小時
6. 定時監控O.D.600值（培養1小時后每半小時測定一次）
7. 當O.D.600值達到0.5-1.0時，從搖床中取出搖瓶，置于冰上冷卻至少15分鐘（需要的話這種方式可以存放培養液數小時）
8. 細胞在4°C 5000g下離心15分鐘，棄上清液（如需要，沉淀可在4°C的10%甘油中保存一兩天）
9. 用滅菌的冰水重懸浮細胞。先用渦旋儀或吸液管重懸浮細胞于少量體積中（幾毫升），然后加水稀釋至離心管的2/3體積。
10. 照上面步驟重復離心，小心棄去上清液
11. 照上面步驟用滅菌的冰水重懸浮細胞
12. 離心，棄上清液
13. 用20ml滅菌的、冰冷后的10%甘油重懸浮細胞 14. 照上面步驟離心，小心棄去上清液（沉淀可能會很松散）
15. 用10%甘油重懸浮細胞至zui終體積為2-3ml
16. 將細胞按150μl等份裝入微量離心管，于-80°C保存

轉化方法:
1. 在冰上解凍電感受態細胞添加1-10μl DNA ，冰上培育約5分鐘
2. 添加1-3μl DNA ，冰上培育約5分鐘
3. 轉移DNA/細胞混合物至冷卻后的2mm電穿孔容器（無泡）中
4. 加載P1000，準備好300μl LB 或 2xYT
5. 對電穿孔容器進行脈沖（200 歐姆, 25μFd, 2.5 千伏）（檢查時間常數，應該在3以上）
6. 立即添加300μl 的LB或2xYT至電穿孔容器中
7. 37°C下培養細胞40分鐘至1小時以復原
8. 轉移細胞至適當的選擇培養基上培養