Western Blot檢測服務(wù)的實驗流程

Western Blot檢測服務(wù)的實驗流程

實驗流程：

蛋白提取-制膠-電泳-轉(zhuǎn)膜-封閉-一抗孵育-二抗孵育-化學(xué)發(fā)光-結(jié)果分析;

送樣運輸要求：新鮮組織，100mg以上，干冰運輸。細胞量為5*10^6以上，收集細胞沉淀，干冰運輸。

預(yù)實驗的內(nèi)容如下：

1）確定一抗的稀釋比例和孵育時間；

2）選擇合適的封閉液及封閉時間；

3）調(diào)節(jié)合適的上樣量，使內(nèi)參條帶灰度值趨于一致。

Western blot結(jié)果及數(shù)據(jù)提供（提供以下兩種圖片，做之前需要和銷售確認好需要哪種）

內(nèi)參蛋白和目的蛋白曝光膠片各一張，可提供掃描圖，實驗報告，包括整個試驗流程所涉及的實驗數(shù)據(jù)和實驗步驟。如需進行蛋白純化服務(wù)，將提供檢測報告

服務(wù)內(nèi)容：

從動物細胞、人或者動物組織、細菌、植物樣品中提取蛋白樣品。

對蛋白樣品進行半定量分析

western檢測

電泳：聚丙烯酰氨凝膠電泳分離蛋白樣品

轉(zhuǎn)膜：濕轉(zhuǎn)

抗體孵育：使用抗體檢測膜上的特定蛋白

Western blot樣本要求

客戶需新鮮或正確保存的蛋白樣品， 檢測目的蛋白的一抗（或由本公司代購）。樣品要求為：

1、裂解樣品總蛋白量>500ug/樣品。

2、細胞樣品總蛋白濃度>1mg/ml。

3、組織樣品總蛋白濃度>10-15mg/ml。

注意事項：

對于細胞和一些微生物樣本，可去除培養(yǎng)基后，加裂解液制備蛋白樣品；若未能及時制備蛋白樣品，去除培養(yǎng)基后，將其液氮速凍后保存于-80℃（約一個月）或保存于液氮（約三個月）；運輸時，樣本（含培養(yǎng)基）加冰袋，保持培養(yǎng)基低溫但不結(jié)冰，或者樣本去除培養(yǎng)基后加干冰。

提取蛋白的樣本最好是新鮮的，同時，以盡可能地提取有效蛋白為準則；樣本需避免反復(fù)凍融。

所有樣本均不建議保存于-20℃。-20℃時，組織、細胞內(nèi)的水會結(jié)晶，細胞活性和組織微觀結(jié)構(gòu)會受到傷害，生物大分子受到組織、細胞內(nèi)多種因素的影響，穩(wěn)定性可能會明顯降低，但部分純化的大分子可以短中期保存。

 -80℃保存條件時，樣本內(nèi)的生化反應(yīng)減弱，可中期保持組織細胞內(nèi)大分子的穩(wěn)定性，短期保持細胞活性和組織微觀結(jié)構(gòu)；

液氮保存可長期保持組織細胞內(nèi)大分子的穩(wěn)定性、細胞活性和組織微觀結(jié)構(gòu)；液氮保存時，盛裝樣本的Ep管管口需用封口膜密封，防止管口爆開造成交叉污染。

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